Gängige Reagenzien in der Zellkultur
Gängige Reagenzien in der Zellkultur
Wenn tierische Zellen oder Gewebe den Körper verlassen, um außerhalb des Körpers kultiviert zu werden, ist es notwendig, sie mit verschiedenen für das Wachstum erforderlichen Nährstoffen und verschiedenen Reagenzien für ein besseres Zellwachstum in vitro zu versorgen. In dieser Ausgabe werde ich kurz einige im Zellkulturprozess verwendete Reagenzienkomponenten und ihre Funktionen vorstellen.
1. Zusammensetzung des Zellkulturmediums
(1).Grundlegendes Kulturmedium
Zu den gängigen Basalmedien gehören hauptsächlich MEM, DMEM und RPMI, die hauptsächlich Puffersysteme wie Glucose, Aminosäuren, Wasser, Spurenelemente und Natriumbicarbonat bereitstellen.
● Glutamin
Es ist eine essentielle Aminosäure, die für das Zellwachstum notwendig ist und an der Proteinsynthese und dem Nukleinsäurestoffwechsel beteiligt ist.
● Phenolrot-Indikator
Als häufig verwendeter Säure-Basen-Indikator zeigt er gelb an, wenn er sauer ist, rot, wenn er neutral ist, und violett, wenn er alkalisch ist. Phenolrot wird als Indikator für den pH-Wert im Medium verwendet.
● Carbonat/PH-Puffersystem
Ein physiologisches pH-Puffersystem. Aufgrund der Säureproduktion während des Zellstoffwechsels wird das HCO3- im Medium nach und nach verbraucht, sodass CO2 rechtzeitig nachgefüllt werden muss, um den pH-Wert in einem bestimmten Bereich zu halten.
(2). Tierserum
Fügen Sie dem Basismedium 2–20 % Serum hinzu, um ein vollständiges Medium zu erhalten. Serum kann die Zellen nicht nur mit den für das Wachstum notwendigen Grundnährstoffen versorgen, sondern enthält auch wichtige Bestandteile des Zellstoffwechsels wie Wachstumsfaktoren, Hormone, Spurenelemente und Ionen.
(3). Antibiotika
Um eine Kontamination der Zellen während des Kultivierungsprozesses zu verhindern, wird dem Vollmedium üblicherweise eine Penicillin-Streptomycin-Mischung, also ein Doppelantikörper, zugesetzt. Penicillin wirkt vor allem gegen grampositive Bakterien und Streptomycin wirkt gegen viele gramnegative Bakterien. .
2. Trypsin-EDTA
Trypsin kann das Protein zwischen den Zellen hydrolysieren und die Zellen dann trennen. EDTA ist ein chemischer Chelatbildner mit geringer Toxizität und hat eine diskrete Wirkung auf adhärente Zellen. Wenn die beiden in Kombination verwendet werden, ist die Effizienz der Zelldispersion höher. Dieser Schritt wird Verdauungszellen genannt. Für verschiedene Zellen gelten unterschiedliche Anforderungen an die Temperatur, Zeit und Konzentration des Trypsins bei der Verwendung. Bei unzureichender Verdauung können die Zellen nicht verdaut werden und eine übermäßige Verdauung führt zu Zellschäden. Da Serum im Medium die Aktivität von Trypsin verringern kann, wird normalerweise Vollmedium verwendet, um die Zellverdauung zu beenden.
3. PBS-Puffer
PBS ist eine phosphatgepufferte Salzlösung mit Salzausgleich und einstellbarer pH-Pufferwirkung. Es wird im Allgemeinen zum Waschen von Zellen und zur Aufrechterhaltung des osmotischen Drucks der Zellen verwendet.
4. Dimethylsulfoxid (DMSO)
Ein wichtiges eindringendes Zellschutzmittel und ein wichtiger Bestandteil der Kryokonservierungsflüssigkeit für Zellen. Während des Kryokonservierungsprozesses von Zellen kann DMSO schnell die Zellmembran durchdringen und in die Zelle eindringen, den Gefrierpunkt senken, den Gefrierprozess verzögern, die Ionenkonzentration in der Zelle erhöhen, die Bildung von Eiskristallen in der Zelle verringern und die Zellzahl reduzieren Schaden.
5. Mykoplasmen-Inhibitoren
Eine Kontamination mit Mykoplasmen ist eine häufige Kontaminationsquelle im Zellkulturprozess. Allerdings können Mykoplasmen-Inhibitoren eingesetzt werden, um Mykoplasmen in der Zellflüssigkeit im Anfangsstadium der Kontamination zu eliminieren, sodass das Experiment fortgesetzt werden kann.
6. Trypanblau-Farbstoff
Ein biologisches Färbereagenz, das üblicherweise zum Nachweis der Zellmembranintegrität verwendet wird. Aufgrund des Verlusts der Zellmembranintegrität und der erhöhten Permeabilität können tote Zellen durch Trypanblau blau gefärbt werden, während lebende Zellen nicht gefärbt werden, da sie über intakte Zellmembranen verfügen, die Trypanblau vom Eindringen in die Zelle ausschließen können. Lebende und tote Zellen können unter dem Mikroskop anhand der Zellfarbe unterschieden werden, was für die Zählung lebender Zellen praktisch ist.
