Der Unterschied und die Anwendung von vier gängigen PCR-Instrumenten

PCR: Polymerase-Kettenreaktion, bei der DNA in vitro bei 95 °C entwickelt (denaturiert) wird Bei 55 °C werden Primer und Einzelstränge nach dem Prinzip der Basenkomplementärpaarung kombiniert (Annealing) und anschließend die Temperatur angepasst bis etwa 72 °C synthetisiert DNA-Polymerase komplementäre Stränge (verlängert sich) entlang der Richtung von Phosphorsäure zu Zucker mit fünf Kohlenstoffatomen (5'-3').

Das PCR-Instrument ist eigentlich ein Temperaturkontrollgerät, das eine Temperaturkontrolle zwischen 95 °C, 55 °C und 72 °C gut durchführen kann.

Je nach Zweck der DNA-Amplifikations- und Nachweisstandards können PCR-Instrumente unterteilt werden in: gewöhnliche PCR-Instrumente, Gradienten-PCR-Instrumente, In-situ-PCR, quantitative Echtzeit-Fluoreszenz-PCR-Instrumente usw.

①Normale PCR-Maschine

Im Allgemeinen wird ein PCR-Gerät, das nur eine bestimmte Annealing-Temperatur für eine PCR-Amplifikation ausführen kann, als gewöhnliches PCR-Gerät bezeichnet, das auch ein traditionelles PCR-Gerät ist. Wenn Sie es für verschiedene Glühtemperaturen verwenden möchten, müssen Sie es mehrmals ausführen.

Gewöhnliche PCR-Maschinen werden hauptsächlich in der wissenschaftlichen Forschung, Lehre, klinischen Medizin, Inspektion, Quarantäne usw.

②Gradienten-PCR-Instrument

Die einmalige PCR-Amplifikation kann eine Reihe verschiedener Annealing-Temperaturbedingungen (normalerweise 12 Temperaturgradienten) einstellen, die als Gradienten-PCR-Instrument bezeichnet werden. Unterschiedliche DNA-Fragmente haben unterschiedliche optimale Annealing-Temperaturen.Durch Einstellen einer Reihe von Gradienten-Annealing-Temperaturen für dieAmplifikation kann die einmalige PCR-Amplifikation die am besten geeignete Annealing-Temperaturmit hohem Expressionsniveau für eine effektive Amplifikation aussortieren.

Das Gradienten-PCR-Instrument wird hauptsächlich verwendet, um die Amplifikation einer unbekannten DNA-Annealing-Temperatur zu untersuchen, was Zeit und Kosten spart. Es kann auch als normale PCR verwendet werden, ohne einen Gradienten einzustellen. Das Gradienten-PCR-Instrument wird hauptsächlich in der wissenschaftlichen Forschung, in Lehreinrichtungen, in der Inspektion, in der Quarantäne usw. verwendet.

③In-situ-PCR-Maschine

PCR dient dazu, DNA aus Zellen oder Geweben für eine Genamplifikationsreaktion zu extrahieren, während In-situ-PCR die Integrität von Zellen oder Geweben aufrechterhält, das PCR-Reaktionssystem in Gewebe und Zellen eindringen lässt und Gene an der Stelle der Ziel-DNA der Zelle durchführt .Verstärkung. Es kann nicht nur die Ziel-DNA nachgewiesen werden, sondern auch der Zelltyp, in dem die Ziel-DNA existiert, was der Untersuchung der Beziehung zwischen der Ziel-DNA und der Zelle förderlicher ist.

Das In-situ-PCR-Instrument wird hauptsächlich verwendet für: (1) Nachweis exogener Genfragmente, Erhöhung der Nachweisrate, Fokussierung auf die Untersuchung von Virusinfektionen wie HIV, HPV, HBV, CMV usw.; (2) Beobachtung der Verteilung von Krankheitserregern im Körper Gesetz (3) Endogene Genfragmente, wie humane monogene Erkrankungen, rekombinante Gene, translozierte Chromosomen, Ig-mRNA-Fragmente, Onkogenfragmente usw. (4) Nachweis eingeführter Gene, (5) Nachweis genetischer Erkrankungen wie β-Thalassämie.

④Quantitatives fluoreszierendes Echtzeit-PCR-Instrument

Das Fluoreszenzsignal-Erfassungssystem und das Computeranalyse- und Verarbeitungssystem werden auf der Grundlage des üblichen PCR-Instrumentendesigns hinzugefügt, um ein PCR-Instrument mit quantitativer Fluoreszenzfunktion zu bilden. Das Prinzip der PCR-Amplifikation ist das gleiche wie bei der gewöhnlichen PCR-Amplifikation: Die während der PCR-Amplifikation hinzugefügten Primer werden mit Isotopen, Fluorescein usw. markiert, und die Primer und Fluoreszenzsonden werden verwendet, um gleichzeitig spezifisch an die Matrize zu binden Verstärkung. Das verstärkte Ergebnis wird über das Echtzeit-Erfassungssignal des Fluoreszenzsignal-Erfassungssystems mit dem Computeranalyse- und Verarbeitungssystem verbunden, und die quantifizierte Echtzeit-Ergebnisausgabe wird erhalten.

Die quantitativen Fluoreszenz-PCR-Maschinen sind in Einkanal-, Zweikanal- und Mehrkanal-PCs unterteilt. Wenn nur eine Fluoreszenzsonde für die Markierung verwendet wird, verwenden Sie einen einzigen Kanal, verwenden Sie mehrere Kanäle, wenn mehrere Fluoreszenzmarkierungen vorhanden sind. Ein einzelner Kanal kann auch Multi-Fluoreszenzmarker und Zielgen-Expressionsprodukte nachweisen, da jeweils nur eine Zielgen-Amplifikationsmenge nachgewiesen werden kann und mehrere Amplifikationen erforderlich sind, um die Menge verschiedener Zielgenfragmente nachzuweisen. Mehrfachkanäle sind förderlich für Multiplex-PCR und realisieren die Funktion, mehrere Zielgene gleichzeitig zu detektieren.

Das quantitative Fluoreszenz-PCR-Instrument wird hauptsächlich in klinischen medizinischen Tests, in der biomedizinischen Forschung und Entwicklung, in der Lebensmittelindustrie, in wissenschaftlichen Forschungseinrichtungen usw. Die quantitative Fluoreszenzdetektionstechnologie hat viele Aspekte der klinischen Diagnose, wobei sie sich hauptsächlich auf die klinische Diagnose von Krankheiten konzentriert, die durch verschiedene Krankheitserreger verursacht werden, wie z.