Korrekte Verwendung von Anaerobier-Inkubatoren

I. Bedienung: Erzeugung eines anaeroben Milieus

1. Einstellen des Ausgangsdrucks der Stickstoff- und Gasgemischflaschen: Stellen Sie das Druckminderungsventil auf ca. 0,1 MPa ein.

2. Schalten Sie den Netzschalter und den Temperaturregler ein und stellen Sie die gewünschte Temperatur ein. Die Temperatur im Inkubator kann im Arbeitsraum frei gewählt und geregelt werden.

3. Platzieren Sie das benötigte Zubehör und die Ausrüstung entsprechend den Anwendungsanforderungen und legen Sie zwei ungiftige Plastikbeutel in den Arbeitsraum.

4. Geben Sie 1000 g getrocknetes Palladiumgranulat (versiegelt) und 500 g Trockenmittel zusammen mit einem anaeroben Indikator (versiegelt) in die Arbeitskammer.

5. Schließen Sie die innere und äußere Tür der Probenahmekammer fest und führen Sie eine Vakuumprüfung durch.

6. Zweiter Stickstoffaustausch in der Arbeitskammer:

(1) Führen Sie einen Gummischlauch in den Lufteinlass der Arbeitskammer ein und stecken Sie das andere Ende in einen Plastikbeutel.

(2) Schließen Sie den Stickstoffeinlass an, öffnen Sie das Stickstoffregelventil, füllen Sie beide Plastikbeutel mit Stickstoff und verschließen Sie die Beutelöffnungen fest.

(3) Ziehen Sie Latexhandschuhe über den Flanschring des Sichtfensters und verschließen Sie diese fest.

(4) Lassen Sie den Stickstoff aus den Plastikbeuteln langsam in die Arbeitskammer ab, bis der gesamte Stickstoff entwichen ist.

7. Zweiter Stickstoffaustausch in der Arbeitskammer: Wiederholen Sie den Stickstofffüllvorgang und achten Sie darauf, das Ablassventil jederzeit zu öffnen und zu schließen.

8. Tertiärer Gasaustausch in der Operationskammer:

(Gasmischungsverhältnis: N₂ 90 %, H₂ 5 %, CO₂ 5 %).

(1) Gasweg ändern, Gaseinlassventil öffnen und Auslassventil während des Befüllens jederzeit öffnen und schließen.

(2) Nach dem Befüllen der Plastikbeutel mit Gasmischung das Dreiwegeventil schließen. (3) Gasmischung aus den Plastikbeuteln langsam in die Operationskammer ablassen.

(4) Nach drei Gasaustauschzyklen ist der Sauerstoffgehalt in der Operationskammer auf Spuren reduziert.

9. Palladiumgranulat-Sauerstofffänger in der Operationskammer einschalten und die Stromversorgung des Sauerstoff-katalytischen Desoxygenierungsgeräts anschließen. Nach einer Stunde die Farbänderung des Anaerobier-Indikatorstreifens beobachten. Eine Farbänderung zeigt an, dass die Operationskammer anaerobe Bedingungen erreicht hat.

10. UV-Sterilisationslampe zur Sterilisation der Kammer einschalten. Die Sterilisationszeit wird vom Benutzer festgelegt.

II. Platzierung und Kultivierung von Bakterienstämmen

1. Tür der Probenkammer prüfen und schließen.

2. Äußere Tür der Probenkammer öffnen, Bakterienstamm in die Probenkammer geben und die äußere Tür schließen.

3. Drei Stickstoffspül- und -austauschvorgänge in der Probenkammer durchführen: Zuerst auf ein Vakuum von mindestens 500 mmHg (66 kPa) evakuieren, dann das Stickstoffventil manuell öffnen, bis der Zeiger auf Null zurückkehrt, bevor der nächste Arbeitsschritt durchgeführt wird.

4. Bei einem niedrigeren Vakuumniveau muss die Anzahl der Austauschzyklen erhöht werden. 

5. Nach dem Öffnen und Schließen der Türen der Probenkammer sollte zur Inspektion und Unterstützung ein niedriges Vakuum von 100 mmHg (13 kPa) angelegt werden.

6. Bedingungen für den Langzeitbetrieb des Anaerobinkubators:

(1) Die Anzeige für den Anaerobierstatus im Operationssaal ist täglich zu überprüfen. Bei normalem Wert kann der Betrieb fortgesetzt werden. Bei Abweichungen muss die Luftzufuhr unterbrochen werden.

(2) Um die anaeroben Bedingungen aufrechtzuerhalten, sollte kontinuierlich eine geringe Menge Mischgas zugeführt werden, um die katalytische Absorption des zugeführten Wasserstoffs mit Spuren von Sauerstoff zu gewährleisten. Die Durchflussrate des Mischgases sollte ca. 10 ml pro Minute betragen.

(3) Trockenmittel und Impfschutz sind alle 3 Tage der kontinuierlichen Inkubation zu wechseln.

7. Anwendung des Sterilisators für Impfstäbe:

(1) Zum Sterilisieren des Impfstabs wird ein Nickel-Chrom-Heizdraht kurzgeschlossen und bis zur Rotglut erhitzt.

(2) Das Wachs mit Schmelzpunkt kann direkt auf den Impfstab gelegt werden. Durch Drehen der Wachsöffnung des Reagenzglases kann das Wachs geschmolzen werden.